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發(fā)布時(shí)間： 2019-08-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 1197次polyplus寶利嘉是陽(yáng)離子化的大分子多聚乙烯亞胺(PEI)及其衍生物，其與外源基因結(jié)合形成顆粒狀，與細(xì)胞表面的蛋白多糖結(jié)合，通過(guò)細(xì)胞"內(nèi)吞作用"進(jìn)入細(xì)胞。PEI-復(fù)合體具有質(zhì)子海綿的特性，能吸收溶酶體的H+，在復(fù)合體中形成酸性環(huán)境使核酸酶失活，保護(hù)DNA免受核酸酶的降解。進(jìn)入細(xì)胞后，JetPEI復(fù)合體囊泡腫脹破裂，將DNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。polyplus寶利嘉的基本步驟：1、JetPEI溶液2μl和質(zhì)粒DNA1μg混合5-30分鐘。2、將JetPEI-DNA復(fù)合體溶液加入到細(xì)胞液中(可以在含血清的培養(yǎng)基中)。3、檢測(cè)：N/P比率(影響轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵)N/P比率是對(duì)JetPEI復(fù)合體的所帶電荷的度量。它指的是DNA分子帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)與JetPEI中N殘基的摩爾比，是衡量核酸與轉(zhuǎn)染試劑比例的參數(shù)。從理論上講，JetPEI/DNA復(fù)合體的電中性為N/P=2-3，但實(shí)際操作時(shí)，N/P=5-10效果較好。polyplus寶利嘉的轉(zhuǎn)染試劑的類(lèi)型：1、JetPEI轉(zhuǎn)染試劑：JetPEI是PolyPlus-transfection的主導(dǎo)產(chǎn)品，毒性低，對(duì)細(xì)胞不會(huì)造成傷害。它能把基因轉(zhuǎn)入各種粘附或懸浮的細(xì)胞系中以及原代細(xì)胞。2、Invivo-JetPEI轉(zhuǎn)染試劑：通過(guò)靜脈、大腦、腹膜以及氣管等體內(nèi)途徑進(jìn)行轉(zhuǎn)染，目前已在小鼠、大鼠、鴨、豚鼠和猴等動(dòng)物身上取得成功。3、TaggedJetPEIs：細(xì)胞介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染試劑TaggedJetPEIs是偶聯(lián)有配體的PEI衍生物，可將基因轉(zhuǎn)入特殊的細(xì)胞。A、JetPEI-Gal&invivo-JetPEI-Gal(肝細(xì)胞介導(dǎo))PEI衍生物，偶聯(lián)有半乳糖。受體細(xì)胞：細(xì)胞表面表達(dá)半乳糖特異性膜血凝素的細(xì)胞，如肝細(xì)胞。B、JetPEI-Man&invivo-JetPEI-Man(樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)PEI衍生物，偶聯(lián)有甘露糖。受體細(xì)胞：細(xì)胞表面表達(dá)甘露糖特異性受體的細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞。C、JetPEI-RGD(上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞)PEI衍生物，偶聯(lián)有RGD肽鏈。受體細(xì)胞：細(xì)胞表面表達(dá)整合素的細(xì)胞，如上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。4、FluoJetPEI：熒光轉(zhuǎn)染試劑A、JetPEI-FluoF：PEI衍生物，偶聯(lián)熒光素FluoF，通常用于胞內(nèi)定位研究，適于熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀的檢測(cè)。B、JetPEI-FluoR：PEI衍生物，偶聯(lián)四甲基羅丹明FluoR，常用于雙色標(biāo)記和協(xié)同定位的實(shí)驗(yàn)中，如用于綠色熒光蛋白或FITC標(biāo)記的質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染。C、Invivo-JetPEI-FluoF&Invivo-JetPEI-FluoR：PolyPlus-transfection也提供體內(nèi)轉(zhuǎn)染的熒光試劑，常用于生物分布研究。5、JetPEI-Biotin和invivo-JetPEI-Biotin：PEI衍生物，偶聯(lián)Biotin，通過(guò)鏈親和素檢測(cè)JetPEI/DNA在細(xì)胞內(nèi)的定位和分布。